ⅠNacido ucleicointroduzione
L'acido nucleico è suddiviso in acido desossiribonucleico (DNA) e acido ribonucleico (RNA), tra i quali l'RNA è suddiviso in RNA ribosomiale (rRNA), RNA messaggero (mRNA) e RNA di trasferimento (tRNA) in base alle sue diverse funzioni.Il DNA è principalmente concentrato nel nucleo, nei mitocondri e nel cloroformio, mentre l'RNA è distribuito principalmente nel citoplasma.In quanto base materiale dell'espressione genica, l'estrazione dell'acido nucleico svolge un ruolo estremamente importante nella ricerca in biologia molecolare e nella diagnosi molecolare clinica.La concentrazione e la purezza dell'estrazione dell'acido nucleico influenzeranno direttamente la successiva PCR, il sequenziamento, la costruzione del vettore, la digestione enzimatica e altri esperimenti.
Ⅱ Metodo di estrazione e purificazione dell'acido nucleico
① Metodo di estrazione con fenolo/cloroformio
L'estrazione con fenolo/cloroformio è un metodo classico per l'estrazione del DNA, che utilizza principalmente due diversi solventi organici per trattare i campioni, dissolvendo l'acido nucleico a base di DNA nella fase acquosa, i lipidi nella fase organica e le proteine tra le due fasi.Questo metodo presenta i vantaggi di basso costo, elevata purezza e buon effetto.Gli svantaggi sono operazioni complicate e tempi lunghi.
② Metodo Trizol
Il metodo Trizol è un metodo classico per l'estrazione dell'RNA.Il metodo Trizol è suddiviso in fase acquosa e fase organica dopo centrifugazione con cloroformio, in cui l'RNA viene disciolto nella fase acquosa, la fase acquosa viene trasferita in una nuova provetta EP, si ottiene la precipitazione dopo l'aggiunta di isopropanolo e quindi la purificazione con etanolo.Questo metodo è adatto per l'estrazione di RNA da tessuti animali, cellule e batteri.
③ Metodo di purificazione della colonna centrifuga
Il metodo di purificazione della colonna centrifuga può adsorbire il DNA in modo specifico attraverso speciali materiali di adsorbimento della matrice di silicio, mentre l'RNA e le proteine possono passare agevolmente, quindi utilizzare un PH alto e basso per combinare l'acido nucleico, l'eluizione a basso valore di PH e sale per separare e purificare l'acido nucleico.I vantaggi sono l'elevata concentrazione di purificazione, l'elevata stabilità, l'assenza di solventi organici e il basso costo.Lo svantaggio è che deve essere centrifugato passo dopo passo, più passaggi operativi.
④ Metodo perline magnetiche
Il metodo delle perle magnetiche consiste nel dividere il campione di tessuto cellulare attraverso il lisato, rilasciare l'acido nucleico nel campione, quindi le molecole di acido nucleico vengono specificamente adsorbite sulla superficie della perla magnetica, mentre le impurità come proteine e zuccheri vengono lasciate in il liquido.Attraverso le fasi di scissione del tessuto cellulare, legame di sferette magnetiche con acido nucleico, lavaggio dell'acido nucleico, eluizione dell'acido nucleico, ecc., si ottiene infine acido nucleico puro.I vantaggi sono il funzionamento semplice e l'utilizzo a breve termine, senza la necessità di centrifugazione a gradini.Ha bassi requisiti tecnici e può realizzare operazioni automatiche e di massa.La combinazione specifica di biglia magnetica e acido nucleico rende l'acido nucleico estratto ad alta concentrazione e purezza.Lo svantaggio è che l'attuale prezzo di mercato è relativamente costoso.
⑤ Altri metodi
Oltre ai quattro metodi di cui sopra, esistono il cracking bollente, il metodo del sale concentrato, il metodo del detergente anionico, il metodo ad ultrasuoni e il metodo enzimatico, ecc.
Ⅲ Tipo di estrazione dell'acido nucleico
Foregene dispone della piattaforma di PCR diretta leader a livello mondiale, piattaforma di isolamento dell'RNA a doppia colonna (solo DNA + solo RNA).I prodotti principali includono kit di isolamento DNA/RNA, PCR e reagenti PCR diretti serie di reagenti di laboratorio molecolare.
① Estrazione totale dell'RNA
I campioni di estrazione totale dell'RNA includono sangue, cellule, tessuti animali, piante, virus, ecc. L'elevata purezza e l'elevata concentrazione di RNA totale possono essere ottenute attraverso l'estrazione totale dell'RNA, che può essere utilizzata in RT-PCR, analisi dei chip, traduzione in vitro, clonazione molecolare, Dot Blot e altri esperimenti.
Relativo al foregeneKit di isolamento dell'RNA
Kit di isolamento dell'RNA totale animale--Estrarre in modo rapido ed efficiente RNA totale di elevata purezza e alta qualità da vari tessuti animali.
Kit di isolamento dell'RNA totale delle cellule--È possibile ottenere RNA totale altamente purificato e di alta qualità da varie cellule in coltura in 11 minuti.
Kit di isolamento dell'RNA totale della pianta--Estrazione rapida di RNA totale di alta qualità da campioni di piante a basso contenuto di polisaccaridi e polifenoli.
Kit di isolamento dell'RNA virale--Isolare e purificare rapidamente l'RNA virale da campioni come plasma, siero, fluidi corporei privi di cellule e surnatanti di colture cellulari.
② Estrazione del DNA genomico
I campioni di estrazione del DNA genomico comprendono terreno, feci, sangue, cellule, tessuti animali, piante, virus, ecc. -throughput sequencing e altri esperimenti.
Relativo al foregeneKit di isolamento del DNA
Kit di isolamento del DNA del tessuto animale--Rapida estrazione e purificazione del DNA genomico da più fonti, come tessuti animali, cellule, ecc.
Kit midi del DNA del sangue (1-5 ml)--Purifica rapidamente il DNA genomico di alta qualità dal sangue anticoagulato (1-5 ml).
Kit di isolamento del DNA con tampone buccale/scheda FTA--Purifica rapidamente il DNA genomico di alta qualità da campioni di tamponi buccali/FTA Card.
Kit di isolamento del DNA vegetale--Purifica rapidamente e ottieni DNA genomico di alta qualità da campioni di piante (inclusi polisaccaridi e campioni di piante di polifenoli)
③ Estrazione del plasmide
Il plasmide è una specie di piccola molecola circolare di DNA nelle cellule, che è un vettore comune per la ricombinazione del DNA.Il metodo di estrazione del plasmide consiste nel rimuovere l'RNA, separare il plasmide dal DNA genomico batterico e rimuovere proteine e altre impurità per ottenere un plasmide relativamente puro.
Mini kit generale per plasmidi--Purifica rapidamente DNA plasmidico di alta qualità da batteri trasformati per esperimenti di biologia molecolare di routine come la trasformazione e la digestione enzimatica
④ Altri tipi di estrazione, estrazione di miRNA, ecc.
Kit di isolamento del miRNA animale--Estrazione rapida ed efficiente di piccoli frammenti di RNA di 20-200nt miRNA, siRNA, snRNA da vari tessuti e cellule animali
Ⅳ Requisiti per l'estrazione dell'acido nucleico e il risultato della purificaziones
① Per garantire l'integrità della struttura primaria dell'acido nucleico.
② Ridurre l'interferenza di proteine, zuccheri, lipidi e altre macromolecole
③ Non dovrebbero esserci solventi organici o alte concentrazioni di ioni metallici che possono inibire l'enzima nei campioni di acido nucleico.
④ La contaminazione da RNA e altri acidi nucleici deve essere eliminata durante l'estrazione del DNA e viceversa.
Tempo di pubblicazione: 24-nov-2022
