ⅠNacido ucleicoiintroduzione
L'acido nucleico è diviso in acido desossiribonucleico (DNA) e acido ribonucleico (RNA), tra i quali l'RNA è diviso in RNA ribosomiale (rRNA), RNA messaggero (mRNA) e RNA di trasferimento (tRNA) a seconda delle sue diverse funzioni.Il DNA è concentrato principalmente nel nucleo, nei mitocondri e nel cloroformio, mentre l'RNA è distribuito principalmente nel citoplasma.Essendo la base materiale dell'espressione genica, l'estrazione dell'acido nucleico svolge un ruolo estremamente importante nella ricerca di biologia molecolare e nella diagnosi molecolare clinica.La concentrazione e la purezza dell'estrazione dell'acido nucleico influenzeranno direttamente la successiva PCR, il sequenziamento, la costruzione del vettore, la digestione enzimatica e altri esperimenti.
Ⅱ Metodo di estrazione e purificazione degli acidi nucleici
① Metodo di estrazione con fenolo/cloroformio
L'estrazione con fenolo/cloroformio è un metodo classico per l'estrazione del DNA, che utilizza principalmente due diversi solventi organici per trattare i campioni, sciogliendo l'acido nucleico a base di DNA nella fase acquosa, i lipidi nella fase organica e le proteine tra le due fasi.Questo metodo presenta i vantaggi di basso costo, elevata purezza e buon effetto.Gli svantaggi sono il funzionamento complicato e i tempi lunghi.
② Metodo Trizol
Il metodo Trizol è un metodo classico per l'estrazione dell'RNA.Il metodo Trizol è diviso in fase acquosa e fase organica dopo centrifugazione con cloroformio, in cui l'RNA viene disciolto nella fase acquosa, la fase acquosa viene trasferita in una nuova provetta EP, si ottiene la precipitazione dopo l'aggiunta di isopropanolo e quindi la purificazione con etanolo.Questo metodo è adatto per l'estrazione di RNA da tessuti animali, cellule e batteri.
③ Metodo di purificazione con colonna centrifuga
Il metodo di purificazione della colonna centrifuga può assorbire il DNA in modo specifico attraverso speciali materiali di adsorbimento della matrice di silicio, mentre l'RNA e le proteine possono passare senza intoppi e quindi utilizzare un pH elevato a basso contenuto di sale per combinare l'acido nucleico, un'eluizione a basso contenuto di sale e un valore di PH elevato per separare e purificare l'acido nucleico.I vantaggi sono l'elevata concentrazione di purificazione, l'elevata stabilità, l'assenza di solventi organici e il basso costo.Lo svantaggio è che deve essere centrifugato passo dopo passo, più fasi operative.
④ Metodo delle perline magnetiche
Il metodo delle sfere magnetiche consiste nel dividere il campione di tessuto cellulare attraverso il lisato, rilasciare l'acido nucleico nel campione e quindi le molecole di acido nucleico vengono specificamente adsorbite sulla superficie della sfera magnetica, mentre le impurità come proteine e zuccheri vengono lasciate all'interno il liquido.Attraverso le fasi di scissione del tessuto cellulare, legame delle sfere magnetiche con acido nucleico, lavaggio dell'acido nucleico, eluizione dell'acido nucleico, ecc., si ottiene infine l'acido nucleico puro.I vantaggi sono il funzionamento semplice e l'utilizzo in breve tempo, senza la necessità di centrifugazione a fasi.Ha requisiti tecnici bassi e può realizzare operazioni automatiche e di massa.La combinazione specifica di biglia magnetica e acido nucleico rende l'acido nucleico estratto con elevata concentrazione e purezza.Lo svantaggio è che l’attuale prezzo di mercato è relativamente alto.
⑤ Altri metodi
Oltre ai quattro metodi sopra menzionati, esistono il cracking mediante ebollizione, il metodo del sale concentrato, il metodo del detergente anionico, il metodo ad ultrasuoni e il metodo enzimatico, ecc.
Ⅲ Tipo di estrazione dell'acido nucleico
Foregene dispone della piattaforma PCR diretta leader a livello mondiale, piattaforma di isolamento dell'RNA a doppia colonna (solo DNA + solo RNA).I prodotti principali includono kit di isolamento del DNA/RNA, serie di reagenti da laboratorio molecolare per PCR e reagenti PCR diretti.
① Estrazione totale dell'RNA
I campioni di estrazione dell'RNA totale includono sangue, cellule, tessuti animali, piante, virus, ecc. Elevata purezza e alta concentrazione di RNA totale possono essere ottenute attraverso l'estrazione di RNA totale, che può essere utilizzata in RT-PCR, analisi di chip, traduzione in vitro, clonazione molecolare, Dot Blot e altri esperimenti.
Relativo al foregeneKit di isolamento dell'RNA
Kit di isolamento dell'RNA totale animale--Estrai in modo rapido ed efficiente RNA totale di elevata purezza e alta qualità da vari tessuti animali.
Kit di isolamento dell'RNA totale delle cellule--L'RNA totale altamente purificato e di alta qualità può essere ottenuto da varie cellule in coltura in 11 minuti.
Kit di isolamento dell'RNA totale delle piante--Estrai rapidamente RNA totale di alta qualità da campioni di piante con un basso contenuto di polisaccaridi e polifenoli.
Kit di isolamento dell'RNA virale--Isolare e purificare rapidamente l'RNA virale da campioni quali plasma, siero, fluidi corporei privi di cellule e surnatanti di colture cellulari.
② Estrazione del DNA genomico
I campioni di estrazione del DNA genomico includono terreno, feci, sangue, cellule, tessuti animali, piante, virus, ecc. L'estrazione del DNA genomico può essere utilizzata nella digestione enzimatica, nella costruzione di librerie di DNA, nella PCR, nella preparazione di anticorpi, nell'analisi di ibridazione Western blot, nel chip genetico, nell'alta -sequenziamento del throughput e altri esperimenti.
Relativo al foregeneKit di isolamento del DNA
Kit per l'isolamento del DNA di tessuti animali--Estrazione e purificazione rapida del DNA genomico da molteplici fonti, come tessuti animali, cellule, ecc.
Kit Midi DNA del Sangue (1-5ml)--Purificare rapidamente il DNA genomico di alta qualità dal sangue anticoagulato (1-5 ml).
Kit di isolamento del DNA con tampone buccale/scheda FTA--Purificare rapidamente il DNA genomico di alta qualità dai campioni di tampone buccale/scheda FTA.
Kit di isolamento del DNA vegetale--Purificare rapidamente e ottenere DNA genomico di alta qualità da campioni di piante (compresi campioni di piante di polisaccaridi e polifenoli)
③ Estrazione del plasmide
Il plasmide è una sorta di piccola molecola circolare di DNA nelle cellule, che è un vettore comune per la ricombinazione del DNA.Il metodo di estrazione del plasmide consiste nel rimuovere l'RNA, separare il plasmide dal DNA genomico batterico e rimuovere le proteine e altre impurità per ottenere un plasmide relativamente puro.
Mini kit plasmide generale--Purifica rapidamente il DNA plasmidico di alta qualità dai batteri trasformati per esperimenti di biologia molecolare di routine come la trasformazione e la digestione enzimatica
④ Altri tipi di estrazione, estrazione di miRNA, ecc.
Kit di isolamento di miRNA animali--Estrai in modo rapido ed efficiente piccoli frammenti di RNA di 20-200 miRNA, siRNA, snRNA da vari tessuti e cellule animali
Ⅳ Requisiti per l'estrazione dell'acido nucleico e il risultato della purificaziones
① Per garantire l'integrità della struttura primaria dell'acido nucleico.
② Ridurre l'interferenza di proteine, zuccheri, lipidi e altre macromolecole
③ Nei campioni di acido nucleico non devono essere presenti solventi organici o un'elevata concentrazione di ioni metallici che possano inibire l'enzima.
④ L'RNA e altre contaminazioni di acidi nucleici devono essere eliminati durante l'estrazione del DNA e viceversa.
Orario di pubblicazione: 24 novembre 2022
